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- 首頁(yè) >> 抗生素濃度對(duì)牛冷凍精液質(zhì)量的影響
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抗生素是稀釋液里必不可少的藥品，無(wú)論是進(jìn)口的成品稀釋液還是自己配的稀釋液都缺少不了，它是抑制精液里的細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的有效藥品。但是稀釋液里加多少抗生素合適，是不是說(shuō)加的抗生素越多越好呢，我們通過(guò)下面的試驗(yàn)來(lái)告訴大家。以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果是北京奶牛中心檢測(cè)得出。
摘要：本試驗(yàn)用添加了不同濃度抗生素的稀釋液對(duì)5頭種公牛精液進(jìn)行稀釋、封裝和冷凍，檢查牛凍精解凍后的精子活力、畸形率和細(xì)菌數(shù)。結(jié)果表明，抗生素添加范圍在1000～2000IU/mL內(nèi)，凍精活力≥35%，細(xì)菌數(shù)控制在30個(gè)左右，凍精質(zhì)量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。
關(guān)鍵詞：抗生素；牛冷凍精液；細(xì)菌數(shù)；精子活力
種公牛精液質(zhì)量關(guān)系到各地種牛站和廣大奶農(nóng)的切身利益，其中微生物指標(biāo)是直接影響到牛冷凍精液產(chǎn)品質(zhì)量的因素之一。各個(gè)種公牛站除了加強(qiáng)種公牛采精和凍精制作過(guò)程管理以外，還在凍精稀釋液中添加了適量的抗生素來(lái)抑制牛凍精中微生物的生長(zhǎng)繁殖。抗生素添加量的多少除了對(duì)凍精細(xì)菌數(shù)有直接作用外，是否還會(huì)影響牛凍精解凍后的活力和畸形率呢？本試驗(yàn)就不同濃度抗生素對(duì)牛凍精解凍后的精子活力、畸形率和細(xì)菌數(shù)進(jìn)行初步研究和分析，以期得到合理的抗生素添加量，為種公牛凍精生產(chǎn)積累試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
1 材料和方法
1.1 試驗(yàn)種公牛的選擇
選北京奶牛中心種公牛站健康無(wú)病、性欲旺盛、鮮精活力≥75%的荷斯坦成年種公牛5頭，年齡為6～10歲，試驗(yàn)牛編號(hào)1～5。按《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》要求進(jìn)行公牛的飼養(yǎng)管理，采精員和試劑配制員均為固定人員，采精器械同批次消毒過(guò)，每頭牛采精2次，間隔30min。
1.2 儀器設(shè)備及試劑
相差顯微鏡(日本奧林巴斯)、精子密度測(cè)定儀(法國(guó)卡蘇)、細(xì)管灌裝一體機(jī)(法國(guó)卡蘇)、電子天平PB203-N（中國(guó)梅特勒）、超凈化工作臺(tái)（中國(guó)蘇凈）、顯微電視系統(tǒng)（韓國(guó)三星）、青霉素鈉/硫酸鏈霉素（華北制藥廠）、雞蛋（種雞場(chǎng)3天內(nèi)生產(chǎn)）。
1.3 稀釋液的配制
稀釋液為自己配制的卵黃稀釋液。將制作好的稀釋液分成13等份，分別添加不同濃度的青鏈霉素濃縮液，使之成為抗生素濃度為0、200、400、600、800、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000和8000IU /mL的稀釋液。攪拌均勻后放置35℃的恒溫水箱中預(yù)熱備用。
1.4 精液的稀釋和冷凍
采用2次稀釋法稀釋鮮精。先用不含抗生素的稀釋液對(duì)每份鮮精進(jìn)行第一次稀釋，稀釋后分成13等份。將其中一份作為對(duì)照組，只添加等量不含抗生素的稀釋液（抗生素濃度為0），另外12份分別添加含有不同濃度抗生素的等量稀釋液。稀釋后的精液中抗生素濃度分別為0、100、200、300、400、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500和4000IU/mL，在常溫下灌裝到0.25mL細(xì)管內(nèi)并封口印字，然后在4℃的低溫冰柜中平衡3～4h后，放入程序冷凍儀中進(jìn)行程序冷凍。冷凍時(shí)將試驗(yàn)牛的細(xì)管精液放在同一層面上，以保證冷凍環(huán)境一致。
1.5 冷凍精液質(zhì)量檢查
檢查項(xiàng)目人員固定，并且都按照國(guó)標(biāo)GB4143-2008中規(guī)定的程序進(jìn)行操作，檢查凍后精子活力、畸形率和細(xì)菌數(shù)。
1.6 數(shù)據(jù)處理
對(duì)數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，使用EXCEL進(jìn)行處理。
2 結(jié)果
2.1不同濃度抗生素對(duì)牛冷凍精液細(xì)菌數(shù)的影響
國(guó)標(biāo)中規(guī)定，細(xì)菌數(shù)為每劑量精液經(jīng)培養(yǎng)后觀察到的細(xì)菌菌落數(shù)(細(xì)菌數(shù)≤800個(gè)為達(dá)標(biāo))。由表1可見(jiàn)，隨著抗生素濃度逐漸加大，牛凍精中的細(xì)菌數(shù)呈逐漸降低趨勢(shì)。為了便于分析統(tǒng)計(jì)，再將0～500IU/mL和1000～4000IU/mL分成2組，其中0～500IU/mL細(xì)菌數(shù)平均為58.55±65.55個(gè)，1000～4000IU/mL組為17.67±19.62個(gè)，差異極顯著(P<0.01)。
2.2不同濃度抗生素對(duì)種公牛精子畸形率的影響
國(guó)標(biāo)中規(guī)定，精子畸形率為畸形精子占總精子數(shù)的百分率。畸形率≤18%為合格產(chǎn)品。由表2可以看出，抗生素濃度在4000IU/mL以下時(shí)，不同濃度的抗生素對(duì)種公牛凍精畸形率影響不大，均符合國(guó)標(biāo)規(guī)定，且各組間差異不顯著（P>0.5）。
不同濃度的抗生素對(duì)精子活力的影響
國(guó)標(biāo)中規(guī)定，精子活力為在37℃環(huán)境下前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占總精子數(shù)的百分率(活力≥35%為合格產(chǎn)品)。由表3可以看出，隨著抗生素濃度加大，凍精活力呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)。并且抗生素濃度在2500IU/mL以上時(shí)，精子活力下降明顯，且未達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。
2.4不同濃度抗生素對(duì)牛凍精質(zhì)量的影響
由表4可以看出，隨著稀釋液中抗生素濃度增加，在0～4000IU/mL濃度范圍內(nèi)，凍精中的細(xì)菌數(shù)呈下降趨勢(shì)，并且在大于1000IU/mL時(shí)下降明顯；凍精活力在抗生素濃度大于2000IU/mL時(shí)小于35%，沒(méi)能達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)；精子畸形率不受稀釋液中抗生素濃度的影響。
3 結(jié)果與分析
從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，既要控制好凍精中的細(xì)菌數(shù)量，又要使凍精質(zhì)量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，合理的抗生素添加范圍是1000～2000IU/mL。在此范圍內(nèi)，凍精活力≥35%，細(xì)菌數(shù)控制在30個(gè)左右，均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。但是各站也因該根據(jù)自身情況制定合理添加范圍。
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